کلونینگ و بیان ژن فیتازباکتری اشرشیاکلی(appa)در پروکاریوت

thesis

وزارت علوم، تحقیقات و فناوری - دانشگاه فردوسی مشهد - دانشکده کشاورزی
author عبدالله درمانی
adviser محمد رضا نصیری
publication year 1392

abstract

فیتازها گروه ویژه‏ای از فسفاتازها می‏باشند که هیدرولیز مرحله به مرحله فسفات را از مولکول فیتات انجام می‏دهند، فیتات منبع اصلی ذخیره فسفات در دانه گیاهان می‏باشد. این دسته از آنزیم‏ها در بین گیاهان، آغازیان و حیوانات پراکندگی و گستردگی دارند ولی از این میان فیتازهای میکروبی امیدبخش بوده و مورد توجه می‏باشند. فیتاز تولید شده توسط اشرشیاکلی برای استفاده در صنعت مناسب می باشد. در این مطالعه به منظور همسانه سازی و بررسی امکان تولید فیتاز نوترکیب، ژن فیتاز با استفاده از آغازگر های لینکر دار طراحی شده از باکتری اشرشیاکلی ptcc1330، جداسازی شد. پس از انجام واکنش pcr، پلاسمید و وکتور با آنزیم های برشی (1 ecorو bamhi) مورد هضم قرار گرفتند. ژن فیتاز بطور مستقیم در وکتور pet-21a(+)، کلون شد. در نهایت، پس از انجام واکنش اتصال، پلاسمید حاصل به باکتری اشرشیاکلی bl21(de3) .منتقل شد. و جهت تایید صحت، مورد توالی یابی قرار گرفت. نتایج توالی یابی صحت انجام همسانه سازی را نشان داد. سپس سویه بیانی حاوی ژن هدف با استفاده از iptg در غلظت نهایی 1 میلی مولار تحریک شد. نتایج استخراج پروتئین در sds-page الکترو فورز شده و اندازه پروتئین فیتاز تولید شده45 kd تخمین زده شد. کلید واژه ها: فیتاز، اشرشیاکلی، بیان ژن

similar resources

توالی یابی، کلونینگ و امکان سنجی بیان ژن اندوگلوکاناز در پروکاریوت

آنزیم اندوگلوکاناز اولین آنزیم از کمپلکس آنزیمی سلولاز است که باندهای داخلی گلیکوزیدی زنجیره‏ی سلولزی را می‏شکند و زنجیره های پلی ساکاریدی مجزای سلولز را به وجود می‏آورد. یکی از بهترین منابع تولید آنزیم اندوگلوکاناز باکتری باسیلوس سابتیلیس می‏باشد که اندوگلوکاناز مقاوم در برابر حرارت تولید می‏کند. در این تحقیق، ژن کد کننده ی آنزیم اندوگلوکاناز خارج سلولی باکتری باسیلوس سابتیلیس بومی جداسازی شده...

کلونینگ و بیان ژن hly Listeria monocytogenes در Lactococcus lactis

ژن hly یکی از مهم‌ترین عوامل ویرولانس Listeria monocytogenes می‌باشد که پروتئین لیستریولیزین (O (LLO را رمزگذاری می‌کند. LLO یک پروتئین ایمونوژن با قابلیت بالاست، که قادر به برانگیختن ایمنی سلولی و هومورال است و علاوه بر فعالیت همولیتیک، عملکردهای متعدد دیگری نیز دارد. این پروتئین با تخریب فاگولیزوزوم به فرار باکتری از سیتوپلاسم، زنده ماندن و رشد درون سلولیL. monocytogenes کمک می کند.از طرفی La...

full text

کلونینگ و بیان ژن MOMP217 کلامیدیا تراکوماتیس در اشرشیا کولی

Background: Chlamydia trachomatis is a silent, turbulent and unfortunately neglected bacterium which impairs human genital tract function. This Gram-negative obligate intracellular bacterium with unique life cycle and immunopathogenesis result in serious complications, such as Endometritis, pelvic inflammatory disease (PID), infertility, ability to ease HIV transmission and cofactor in human ...

full text

کلونینگ و بررسی بیان ژن hcpD هلیکوباکتر پیلوری

زمینه و هدف: ژن hcpD به عنوان یکی از ژن های کد کننده خانواده پروتئین های غنی از سیستئین هلیکوباکتر پیلوری است. این دسته از پروتئینها سبب تحریک سیستم ایمنی میزبان و تولید آنتی بادی میگردند. هلیکوباکتر پیلوری مستقر در معده انسان سبب بیماریهای گوارشی نظیر: زخم دوازدهه، گاستریت مزمن و سرطان معده میشود. هدف از این مطالعه، تکثیر، جداسازی و همسانه سازی ژن hcpD هلیکوباکتر پیلوری در وکتور pcDNA3.1(-) و ...

full text

بیان و تخلیص پروتئین نوترکیب ژن سنتتیک زنجیره HC تتانوتوکسین در سیستم بیانی پروکاریوت

زمینه و هدف: توکسین کلستریدیوم تتانی یا تتانواسپاسمین عامل بیماری مهلک کزاز است. امروزه از توکسوئید آن به عنوان واکسن استفاده می شود. تتانواسپاسمین شامل سه زنجیره L، HN و HC می باشد. زنجیره HC بخش اتصال دهنده و ایمونوژنیک آن است و به عنوان کاندیدای واکسن مطرح می باشد. هدف از این مطالعه، طراحی و تهیه ژن صناعی زنجیره HC تتانواسپاسمین، بیان و بهینه سازی آن و تخلیص پروتئین نوترکیب حاصل از آن به عنو...

full text

کلونینگ، بیان ژن وتخلیص آنزیم CEL Iاندونوکلئاز از گیاه کرفس

اهداف: آنزیم I CEL یک گلیکوپروتئین گیاهی است که از گیاهان دسته کرفس استخراج می شود و اولین آنزیم یوکاریوتی است که پیوند ناجور را با یک اختصاصیت بالا در یکی از دو رشته DNA برش می دهد. هدف از این پژوهش کلون کردن ژن، بیان و تخلیص آنزیم CEL I اندونوکلئاز و بررسی عملکرد آن بر روی ژنهای جهش یافته در محیط آزمایشگاهی بوده است. مواد و روش ها: در این تحقیق از گیاه کرفس mRNA استخراج شد و سپس RT-PCR صورت گ...

full text

My Resources

Save resource for easier access later

Save to my library Already added to my library

{@ msg_add @}

document type: thesis

وزارت علوم، تحقیقات و فناوری - دانشگاه فردوسی مشهد - دانشکده کشاورزی

Keywords

فیتاز اشرشیاکلی بیان ژن

Hosted on Doprax cloud platform doprax.com